| 級別 | 超純、高純 |
| 含量 | 95 |
| 品牌 | 泛博 |
| 型號 | CCK |
Cell Counting Kit（CCK試劑盒）
| 目錄號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 包裝 |
| 025 | Cell Counting Kit（CCK試劑盒） | 100次 | 1mL |
| 026 | Cell Counting Kit（CCK試劑盒） | 500次 | 5mL |
| 027 | Cell Counting Kit（CCK試劑盒） | 1000次 | 10mL |
| 028 | Cell Counting Kit（CCK試劑盒） | 3000次 | 30mL |
產(chǎn)品簡介：Cell Counting Kit簡稱CCK 試劑盒，為MTT法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。 CCK法與普通的MTT法相比，具有顯著特點：★靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好★操作簡便，省時省力★水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞★無需放射性同位素和有機溶劑，對細胞毒性低★為1瓶溶液，不需要預(yù)制，即開即用★適合于高通量藥物篩選 CCK用途：藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗 操作說明：一、制作標準曲線（測定細胞具體數(shù)量時）1、先用**計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞。2、按比例（例如：1/2比例）依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復(fù)孔。3、接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁，然后加CCK試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標（X軸），OD值為縱坐標（Y軸）的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量（試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK后的培養(yǎng)時間。）二、細胞活性檢測1、在96孔板中接種細胞懸液（100ul/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在37℃,5% CO2的條件下）。2、向每孔加入10 ul的CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。4、用**測定在450nm處的吸光度。5、如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10 ul 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。三、細胞增值-毒性檢測1、在96孔板中配置100ul的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時（在37℃,5% CO2的條件下）。2、向培養(yǎng)板加入10ul不同濃度的待測物質(zhì)。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：6、12、24或48小時）。4、想每孔加入10ul CCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。6、用**測定在450nm處的吸光度。7、如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10 ul 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
備注：
①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入CCK試劑后的培養(yǎng)時間。
②有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔減的差異。加入CCK試劑時，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會干擾OD值讀數(shù)。
③白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。
④當使用標準96孔板時，貼壁細胞的**小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μl 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μl 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。
⑤如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測靈敏度**高。⑥培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。 活力計算：細胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）] ×100
A（加藥）：具有細胞、CCK溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A（0加藥）：具有細胞、CCK溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力 保存條件：4℃避光保存一年有效
